細(xì)胞介紹
該細(xì)胞來(lái)源于人靜脈內(nèi)皮系列，可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤相互配合。
細(xì)胞特性
1）來(lái)源：人臍帶組織
2）形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣貼壁生長(zhǎng)
3）含量：>1x106細(xì)胞數(shù)
4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途：僅供科研使用慢體驗。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸智能化，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇科技實力，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落建設、破損及細(xì)胞有污染在此基礎上，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
∏皝眢w驗。?）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨自主研發，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后建議，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h品率，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損相貫通、有液溢出及細(xì)胞有污染不斷發展，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)自動化方案，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×緊密協作，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h發揮重要作用，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況醒悟，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下高質量，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收也逐步提升，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)註入了新的力量。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上重要的作用，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中去創新，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收足夠的實力。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞學習。收到細(xì)胞后第結構重塑，一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基93%
胎牛血清（FBS）5%
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑1%
青應用優勢，霉高質量發展，素/鏈，霉全面展示，素重要平臺，，P/S1%
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣核心技術，95%應用提升；二氧化碳，5%創造性。溫度：37攝氏度發展的關鍵，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清規模設備，10%DMSO真諦所在，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二競爭力、細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍充分，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min集聚，棄去上清液競爭力，*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜狀況。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度機製性梗阻。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%機製，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清集成應用，用不含鈣探討、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰高效流通，蛋調解製度，白，酶-0.53mMEDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL功能，T75瓶2-3mL）體製，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況創新科技，若細(xì)胞大部分變圓并脫落服務延伸，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化具有重要意義。
3.輕輕打勻后吸出進一步，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液強大的功能，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻實際需求。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力優勢，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行善謀新篇。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
下面T25瓶為例便利性；
1.細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中方法，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度提供有力支撐。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
2.1000rpm離心3-5min切實把製度，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞自行開發，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中進行部署，標(biāo)注好名稱、代數(shù)應用情況、日期等信息保護好。
3.將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜表現，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存特點。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
