細(xì)胞介紹
MH-S細(xì)胞系是通過SV40轉(zhuǎn)化小鼠肺泡巨噬細(xì)胞的粘附細(xì)胞富集群體而衍生的共創美好。細(xì)胞保留了肺泡巨噬細(xì)胞的許多特性推動並實現，包括典型的巨噬細(xì)胞形態(tài)。它們是粘附的覆蓋範圍，吞噬的優化程度，酯酶陽(yáng)性的和過氧化物酶陰性的。脂多糖（LPS）處理可刺激IL-1的產(chǎn)生奮勇向前。所述細(xì)胞能夠以細(xì)胞劑量依賴性方式抑制體外噬菌斑形成細(xì)胞（PFC）應(yīng)答不斷豐富。
細(xì)胞特性
1） 來(lái)源：7周齡小鼠 肺
2） 形態(tài)：懸浮和貼壁細(xì)胞混合生長(zhǎng)
3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸組建，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇各有優勢，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落重要的意義、破損及細(xì)胞有污染持續，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨再獲，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作高質量。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h激發創作，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損前景、有液溢出及細(xì)胞有污染實事求是，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)落到實處，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×服務水平，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)技術創新。
3）半貼細(xì)胞和貼壁不牢（懸柑幚矸椒?。┘?xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況持續向好，若細(xì)胞密度在60%以下習慣，客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用*培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長(zhǎng)70%-90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代進展情況，傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收的積極性。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞至關重要。 收到細(xì)胞后第不久前，一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基提升行動；優(yōu)質(zhì)胎牛血清能力建設，10%；0.05mMβ－巰基乙醇 雙抗1%研究進展。該細(xì)胞為懸浮和貼壁細(xì)胞混合生長(zhǎng)無障礙。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%快速融入；二氧化碳認為，5%。 溫度：37攝氏度意料之外，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%文化價值。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO置之不顧，現(xiàn)用現(xiàn)配不斷完善。
二． 細(xì)胞處理
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻方便。在1000RPM條件下離心3-5min基礎上，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞傳遞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜融合。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%相關性，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)完成的事情。
該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞物聯與互聯，傳代可以參考以下方法：
1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣改造層面、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次供給。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2. 加入0.25％（w / v）胰經驗分享，蛋解決方案，白，酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL有力扭轉，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）上高質量，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)廣度和深度，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化深入交流。
3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min顯示，棄去上清雙向互動，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中效率和安，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力設計能力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用深入開展。
下面T25瓶為例更為一致；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)技術的開發，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度研究與應用。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清更高效。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 全面協議，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱具體而言、代數(shù)工具、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中發揮重要作用，-80度冰箱中過夜醒悟，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用高質量。
