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慢病毒包裝技術檢測服務

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慢病毒(Lentivirus)載體是以 HIV-1 (人類免疫缺陷1型病毒)為基礎發(fā)展起來的基因治療載體探討。具有感染譜廣泛效果、可以有效感染分裂期和靜止期細胞、*穩(wěn)定表達外源基因等優(yōu)點合規意識,因此成為導入外源基因的有力工具密度增加。慢病毒包裝技術檢測服務

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  慢病毒(Lentivirus)載體是以 HIV-1 (人類免疫缺陷1型病毒)為基礎發(fā)展起來的基因治療載體。具有感染譜廣泛創新內容、可以有效感染分裂期和靜止期細胞機遇與挑戰、*穩(wěn)定表達外源基因等優(yōu)點,因此成為導入外源基因的有力工具∩旗侗O督,F(xiàn)在慢病毒系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛應用到各種細胞系的基因過表達集成技術、RNA干擾、microRNA研究以及活體動物實驗中更合理。慢病毒包裝技術慢病毒包裝技術檢測服務

服務項目:

     公司提供慢病毒載體構建適應能力、RNAi(shRNA)、miRNA各方面、過表達和干擾慢病毒包裝以及基于慢病毒技術的穩(wěn)定細胞系構建服務防控。慢病毒包裝技術檢測服務

     公司的慢病毒產(chǎn)品主要為第四代質(zhì)粒系統(tǒng),其特點為高表達適應性,高滴度堅實基礎,快速克隆和易檢測。慢病毒滴度可達到1E+8 TU/mL重要作用,不必濃縮和純化等地,就能感染目的細胞并且通過GFP發(fā)出的綠色熒光來篩選,可以不同實驗者的實驗需求尤為突出,使后續(xù)的實驗更加方便快捷規定。

慢病毒包裝技術檢測服務

 

整體實驗流程

一) 實驗流程(1、2空間載體、3為并列步驟):

      1. 慢病毒過表達質(zhì)粒載體的構建 設計上下游特異性擴增引物高質量,同時引入酶切位點,采用PCR技術(采用高保真KOD酶經驗分享,3K內(nèi)突變率為0%)從模板中(cDNA質(zhì)两鉀Q方案;蛘呶膸欤┱{(diào)取目的基因CDS區(qū)(coding sequence)連入T載體。將CDS區(qū)從T載體上切下系列,裝入慢病毒過表達質(zhì)粒載體作用。

     2. 慢病毒干擾質(zhì)粒載體的構建 合成siRNA對應的DNA頸環(huán)結構,退火后連入慢病毒干擾質(zhì)粒載體。

     3. miRNA載體構建從 Genomic 中調(diào)取基因相應的Mir 前體, 并在調(diào)取引物中引入酶切位點著力增加。

     4. 慢病毒載體的包裝與濃縮純化 制備慢病毒穿梭質(zhì)粒及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒(兩質(zhì)粒包裝系統(tǒng))智能化,三種質(zhì)粒載體分別進行高純度無內(nèi)毒素抽提,共轉(zhuǎn)染293T細胞處理,轉(zhuǎn)染后6 h 更換為*培養(yǎng)基建設,培養(yǎng)48和72h后,分別收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液助力各行,病毒上清液通過超離心濃縮病毒前來體驗。

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