【小貝離心Protocol】超速離心方法制備無(wú)外泌體血清
以外泌體為代表的細(xì)胞外囊泡是近幾年研究的熱點(diǎn)不容忽視，目前的外泌體研究主要通過(guò)研究體外培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)源的外泌體組織了，分析其在體內(nèi)外的功能作用。一般的血清FBS中含有供體細(xì)胞自然分泌的大量Exosomes說服力，而用于Exosome研究的細(xì)胞必須提前更換無(wú)外泌體的血清進(jìn)行培養(yǎng)搶抓機遇，以減少對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的污染。
目前市面上存在著商業(yè)化的無(wú)外泌體血清表示，然而由于其價(jià)格較高等因素全面闡釋，很多研究者選擇自己制備無(wú)外泌體血清創造，而常用的主要是基于超速離心的無(wú)外泌體血清分離方法。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果貢獻法治，如下圖設備製造，使用貝克曼超離自行純化血清，可達(dá)到與商品化無(wú)EV 血清類(lèi)似的效果攻堅克難。
無(wú)外泌體血清制備步驟：
1. 根據(jù)需要處理的血清體積選擇合適的轉(zhuǎn)子與超離管管理。推薦使用Type 45 Ti轉(zhuǎn)子，一次離心可處理6×94ml雙向互動。為避免污染效率和安，可選用貝克曼無(wú)菌無(wú)酶離心管#C14305，單獨(dú)包裝品牌，即拆即用範圍。
2. 在超凈工作臺(tái)，將普通血清置于超離管中紮實做，配平后，進(jìn)行熱封口至關重要。
3. 將封口后的超離管放于離心機(jī)Type 45 Ti轉(zhuǎn)子中提供深度撮合服務，并加入相應(yīng)適配器(如果選用#C14305無(wú)菌無(wú)酶離心管，則需要#342697適配器)的發生，然后擰緊轉(zhuǎn)頭蓋組成部分。
4. 設(shè)置離心程序：4℃，120,000 ×g新的動力，離心18小時(shí)(也有研究者選擇100,000 ×g離心18小時(shí)【2】)的過程中。
5. 離心結(jié)束后，回收上清液廣泛關註，為避免污染促進進步，在超凈工作臺(tái)操作。
6. 收集得到無(wú)外泌體血清優勢領先，并儲(chǔ)存于-20℃中備用迎來新的篇章。
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大 RPM – 45,000
大 RCF - 235,000 x g
k 系數(shù) - 133
離心管數(shù)量/體積/大小/尺寸：
6 x 94 mL
1 ? x 4 in.
38 x 102 mm
轉(zhuǎn)頭容量 - 564 mL
參考文獻(xiàn)
【1】
【2】Tian Y, Gong M, Hu Y, Liu H, Zhang W, Zhang M, Hu X, Aubert D, Zhu S, Wu L, Yan X. Quality and efficiency assessment of six extracellular vesicle isolation methods by nano-flow cytometry. Journal of Extracellular Vesicles. 9: 1697028. PMID 31839906
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