方法一:酸度計法
1. 原理:根據AOCS法解決方案,測定出自于大豆及加工產品的尿素酶活化度創造。
2. 儀器
(1) 可調節(jié)溫度的恒溫水浴鍋
(2) pH計
(3) 50ml碘瓶
3. 試劑
(1) 磷酸二氫鉀
(2) *
(3) 尿素[CO(NH2)2]
(4) 甲苯
(5) 0.05M磷酸緩沖液:
磷酸二氫鉀3.403g 100ml水中
混合1000ml,調pH為7.0
*4.335g 100ml水中
(6) 尿素緩沖液:取分析純尿素15g貢獻法治,溶于500ml磷酸緩沖液設備製造,再加5ml甲苯防腐劑(防止霉菌發(fā)酵),調pH 值為7.0
4. 步驟
0.8g樣品+40ml尿素緩沖液
試樣粉碎到0.35mm以下 搖勻后放入 0.8g樣品+40ml磷酸緩沖液
30℃ 恒溫水浴槽中攻堅克難,每5min搖勻一次管理,反應30min,在5min內測定pH值雙向互動。
5. 計算:尿素酶活化度(pH值上升值)=試樣的pH測定值-空白的pH值
方法二 尿素酶快速測定法——酚紅法(參考法)
稱取0.2g經磨細的豆粕樣品放置試管中效率和安,注入2%尿素1ml,開始計時品牌,加入指示劑*2滴深入開展,再加入8ml蒸餾水,(20-30s)開始震搖試管約10s等形式,直至全脂豆粕浮在液體層技術的開發,每搖動10s約等待3s,再觀察溶液層顏色相貫通,如果出現粉紅色不斷發展,計下時間,與尿素酶活性表對照自動化方案,如果顏色不變緊密協作,則再搖10s約等待3s越來越重要,然后再觀察溶液層顏色,重復操作發揮重要作用,如一直不變醒悟,再重頭開始。(做實驗以前高質量,要先做空白實驗也逐步提升,如果呈粉紅色則指示劑已經不能用,重新配置指示劑智能設備。震搖停止后觀察溶液的顏色時要等3s,不可太快或太慢蓬勃發展,否則會看錯特點,晚間不能做該實驗。
時間(min) | 豆粕尿素酶活性 |
0-1 | 0.9以上 |
1-2 | 0.9-0.7 |
2-3 | 0.7-0.5 |
3-3.5 | 0.5-0.4 |
3.5-4 | 0.4-0.3 |
4-4.5 | 0.3-0.25 |
4.5-5 | 0.25-0.2 |
5-6 | 0.2-0.15 |
6-7 | 0.15-0.1 |
7-9 | 0.1-0.05 |
12無色 | 0 |
方法三:尿素酶活性快速測定法——酚紅法(粗略法)
1. 原理:尿素酶 + 尿素 氨氣(用酚紅作指示劑)
2.試劑
(1) N氫氧化鈉:稱0.4g氫氧化鈉溶于100ml水中重要性。
(2) 0.1N硫酸:將2.77ml濃硫酸加入1000ml水中稀釋又進了一步。
(3) 尿素—酚紅溶液:
0.14g酚紅溶于35ml水中+7ml0.1N氫氧化鈉
混合 0.1N硫酸滴定 琥珀色
21g尿素溶于300ml水中
方法:將一匙粉碎過的黃豆粕放入小玻皿中,將已調好的尿素——酚紅溶液加入小玻皿中的豆粕上多元化服務體系,直至*錦濕規劃,停留5min,觀察豆粕的紅色反應深度。
少量紅點 | 微量活躍(△pH=0.05-0.10) |
約25%紅點 | 中度活躍(△pH=0.10-0.25) |
約50%紅點 | 活躍(△pH=0.30-0.50) |
約75%紅點 | 非硯訑U大;钴S(△pH≧2.0) |
5min沒紅點出現,停留25min任無 | 豆粕過熟 |
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