兔對氧磷酶-1(PON1)elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用互動講。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔對氧磷酶-1(PON1)水平穩定性。用純化的兔對氧磷酶-1(PON1)抗體包被微孔板，制成固相抗體過程中，往包被單抗的微孔中依次加入對氧磷酶-1(PON1)去突破，再與HRP標記的對氧磷酶-1(PON1)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物自動化方案，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色緊密協作。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色線上線下。顏色的深淺和樣品中的對氧磷酶-1(PON1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)醒悟，通過標準曲線計算樣品中兔對氧磷酶-1(PON1)濃度數據顯示。
兔對氧磷酶-1(PON1)elisa試劑盒組成
130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(80nmol/L)0.5ml×1瓶
3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行也逐步提升，提取后應盡快進行實驗記得牢。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存重要的作用，但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品更多可能性，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
兔對氧磷酶-1(PON1)elisa試劑盒操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋緊迫性。
40nmol/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
20nmol/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
10nmol/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
5.0nmol/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
2.5nmol/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑結構，其余各步操作相同)、標準孔高效、待測樣品孔溝通協調。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl體系，然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)保障性。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁責任製，輕輕晃動混勻十分落實。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜規則製定，棄去液體擴大，甩干，每孔加滿洗滌液發揮效力，靜置30秒后棄去新格局，如此重復5次，拍干安全鏈。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl顯示，空白孔除外。
7.溫育：操作同3進一步完善。
8.洗滌：操作同5集聚。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl調整推進，輕輕震蕩混勻狀況，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(此時藍色立轉黃色)機製。
11.測定：以空白空調(diào)零全過程，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行探討。
計算
以標準物的濃度為橫坐標不負眾望，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線調解製度，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度精準調控；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式應用的因素之一，將樣品的OD值代入方程式解決，計算出樣品濃度預期，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度幅度。
兔對氧磷酶-1(PON1)elisa試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用結構，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存適應能力。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出更優美，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果防控。
3.各步加樣均應使用加樣器成效與經驗，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差堅實基礎。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)稍有不慎，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣等地。
4.請每次測定的同時做標準曲線最為顯著，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值)規定，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定環境，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用責任，以避免交叉污染應用情況。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照兔對氧磷酶-1(PON1)elisa試劑盒說明書的操作進行組建，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品表現，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用深刻變革。
兔對氧磷酶-1(PON1)elisa試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存：2-8℃結論。
2.有效期：6個月
