大鼠超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
 

　　本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定大鼠血清流程、血漿核心技術體系、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)的含量穩定性。
 

　　實驗原理：
 

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平。用純化的大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)捕獲抗體包被微孔板我有所應，制成固相抗體不負眾望，往包被的微孔中依次加入大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)，再與HRP標記的檢測抗體結(jié)合調解製度，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物精準調控，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色應用的因素之一，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色解決。顏色的深淺和樣品中的大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)敢於監督，通過標準曲線計算樣品中大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)含量幅度。
 

　　試劑盒組成：
 

　　試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
 

　　說明書 1份 1份
 

　　封板膜 2片 2片
 

　　密封袋 1個 1個
 

　　酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
 

　　標準品 0.3ml×6管 0.3ml×6管 2-8℃保存
 

　　酶標試劑 5 ml×1瓶 10 ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　終止液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　20×濃縮洗滌液 15ml×1瓶 25ml×1瓶 2-8℃保存
 

　　注：標準品濃度依次為：120、60重要的作用、30適應能力、15更優美、7.5各方面、0 ng/mL.
 

　　樣本處理及要求：
 

　　1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘防控，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清適應性，保存過程中如出現(xiàn)沉淀堅實基礎，應(yīng)再次離心。
 

　　2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑重要作用，混合10-20分鐘后等地，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清尤為突出，保存過程中如有沉淀形成規定，應(yīng)該再次離心。
 

　　3. 尿液：用無菌管收集空間載體，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)高質量。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成重要組成部分，應(yīng)再次離心流程。胸腹水、腦脊液參照實行勃勃生機。
 

　　4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時助力各業，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)提供有力支撐。仔細收集上清質生產力。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液技術交流，細胞濃度達到100萬/ml左右先進的解決方案。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份在此基礎上。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)助力各行。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成自主研發，應(yīng)再次離心確定性。
 

　　5. 組織標本：切割標本后，稱取重量損耗。加入一定量的PBS講故事，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆眯阅芊€定。標本融化后仍然保?-8℃的溫度全面革新。加入一定量的PBS(PH7.4)作用，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)行業分類。仔細收集上清技術特點。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用發展邏輯。
 

　　6. 標本采集后盡早進行提取凝聚力量，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗聽得進。若不能馬上進行試驗新的力量，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
 

　　7. 不能檢測含NaN3的樣品便利性，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性全面展示。
 

　　操作步驟
 

　　大鼠超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒1.標準品的加樣：設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL深刻認識；核心技術。
 

　　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)高效、待測樣品孔溝通協調。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)全方位。加樣將樣品加于酶標板孔底部高效節能，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻大局。
 

　　3.加酶：每孔加入酶標試劑100μl新創新即將到來，空白孔除外。
 

　　4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘有序推進。
 

　　5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用設施。
 

　　6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體堅定不移，甩干組合運用，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去迎難而上，如此重復(fù)5次積極，拍干。
 

　　7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl堅持先行，再加入顯色劑B50μl產業，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
 

　　8.終止：每孔加終止液50μl情況較常見，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)可持續。
 

　　9.測定：以空白孔調(diào)零主要抓手，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行構建。
 

　　注意事項：
 

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用創新科技，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存不負眾望。
 

　　2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出高效流通，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果精準調控。
 

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性應用的因素之一，以避免試驗誤差解決。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多敢於監督，*使用排槍加樣幅度。
 

　　4.請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔推進一步。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔的OD值)經過，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)力度。
 

　　5.封板膜只限一次性使用明確了方向，以避免交叉污染。
 

　　6.底物請避光保存勇探新路。
 

　　7.嚴格按照說明書的操作進行單產提升，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
 

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理試驗。
 

　　9.本試劑不同批號組分不得混用勞動精神。
 

　　10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準製度保障。
 

　　計算：
 

　　以標準物的濃度為橫坐標預下達，OD值為縱坐標，
 

　　在坐標紙上繪出標準曲線統籌推進，根據(jù)樣品的OD
 

　　值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度方案；再乘以稀釋
 

　　倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標
 

　　準曲線的直線回歸方程式保護好，將樣品的OD值
 

　　代入方程式組建，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
 

　　倍數(shù)特點，即為樣品的實際濃度深刻變革。
 

　　(此圖僅供參考)
 

　　大鼠超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒 試劑盒性能：
 

　　1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上結論。
 

　　2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15% 。
 

　　檢測范圍：
 

　　3.75 ng/mL - 120 ng/mL
 

　　靈敏度：
 

　　低檢測濃度小于0.1 ng/mL
 

　　保存條件及有效期：
 

　　1.試劑盒保存： 2-8℃質生產力。
 

　　2.有效期： 6個月