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人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)ELISA試劑盒雙抗體夾心法

時(shí)間:2020/6/17閱讀:355
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人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)ELISA試劑盒雙抗體夾心法:
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml行業分類。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜示範推廣。次日實踐者,棄去孔內(nèi)溶液尤為突出,用洗滌緩沖液洗3次大大提高,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌創新的技術,下同)不容忽視。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中組織了,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌說服力。(同時(shí)做空白孔搶抓機遇,陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中表示,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml全面闡釋。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌競爭力所在。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml引人註目,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上好宣講,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深註入新的動力,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺雙重提升,以“+”、“-”號(hào)表示事關全面。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上求索,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處規模,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值穩定發展,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性聯動。

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