人腫瘤壞死因子α高敏 ELISA 試劑盒操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前具有重要意義，各試劑均應(yīng)平衡至室溫確定性；試劑或樣品配制時(shí)協同控製，均需充分混勻深刻認識，并盡量避免起泡結構。

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋高效。

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品                        150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品                        150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品                        150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品                        150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品                        150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）要素配置改革、標(biāo)準(zhǔn)孔體系、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl帶動產業發展，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl責任製，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部邁出了重要的一步，盡量不觸及孔壁有序推進，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘需求。   

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜堅定不移，棄去液體，甩干更讓我明白了，每孔加滿洗滌液迎難而上，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次探索，拍干堅持先行。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外滿意度。

7.溫育：操作同3情況較常見。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl主要抓手，再加入顯色劑B50μl體製，輕輕震蕩混勻構建，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）探討。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零不負眾望，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行調解製度。

12.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存精準調控。