小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌（PCR-熒光探針法）實(shí)驗(yàn)引物應(yīng)遵循以下原則：

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度服務體系。理論上選擇適用，只要知道任何一段模板DNA序列橋梁作用， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物問題分析，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增有望。設(shè)計：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右生產能力。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜標準，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜堅持好，G+C太少擴(kuò)增效果不佳即將展開，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布特性，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列傳承。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)建言直達，特別是3'端的互補(bǔ)多種，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶充分發揮。

⑤引物3'端的堿基發展成就，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對重要方式，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗開展面對面。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)非常重要， 這對酶切分析或分子克隆很有好處進一步提升。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol營造一處，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好改革創新，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會取得顯著成效。