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古朵實(shí)驗(yàn):把好電鏡制樣后一道關(guān)口——染色

時(shí)間:2020/4/9閱讀:1431
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  “七分制樣認為,三分電鏡”,這是電鏡人常掛在嘴邊的一句話機構。電鏡后的結(jié)果好不好的特性,很大程度上取決于樣品制備。樣品制備的后一步基礎,就是染色提供堅實支撐。
 
  染色,是為了提高樣品在電鏡下的反差高產。圖像的反差通常來源于樣品對(duì)電子束的散射能力信息化技術,而它的散射能力則取決于原子組成。
 
  原子序數(shù)越高良好,電子密度越高逐步顯現,散射電子能力越強(qiáng),電鏡下顯黑色引領;
 
  原子序數(shù)越低自動化裝置,電子密度越低,散射電子能力越弱應用前景,電鏡下顯白色開展攻關合作。
 
  生物樣品主要由 C、H預下達、O的有效手段、N、P方案、S 等低原子序數(shù)的元素組成關鍵技術,不足以形成足夠的反差。若利用重金屬離子對(duì)不同細(xì)胞結(jié)構(gòu)的結(jié)合能力不同深入,使各細(xì)胞結(jié)構(gòu)對(duì)電子產(chǎn)生不同散射程度技術研究,則可以增強(qiáng)樣品的反差重要的。
 
常用的染色劑有醋酸鈾和檸檬酸鉛(pH 值在 11 左右)。
 
  醋酸雙氧鈾:以提高核酸姿勢、蛋白質(zhì)和結(jié)締組織纖維的反差為主相互融合。
 
  檸檬酸鉛:對(duì)各種組織結(jié)構(gòu)都有廣泛的親和作用,尤其是細(xì)胞膜系統(tǒng)及脂類物質(zhì)綠色化,對(duì)不能被鋨酸染色的糖原更具有染色作用不同需求。
 
  結(jié)合鈾和鉛不同的染色特性,目前超薄切片染色大多都是將兩種試劑結(jié)合互補(bǔ)保持穩定,雙重染色支撐作用。即先用醋酸鈾染色后,再用檸檬酸鉛動力,以獲得滿意的染色效果同時。
 
  染色方法主要有兩種:
 
  組織塊染色:在脫水至 70%乙醇或bin酮時(shí),將組織塊放在用 70%乙醇或bin酮配制的飽和醋酸鈾溶液中效高性,染色時(shí)間 2 小時(shí)以上模式,或在冰箱中過夜。切片后無需鈾染提升,直接檸檬酸鉛染色通過活化。
 
  切片染色:對(duì)載網(wǎng)上的超薄切片進(jìn)行染色,通常為雙染色的特點,即*行醋酸鈾溶液染色健康發展,一般 10-30min,雙蒸水清洗后再進(jìn)行檸檬酸鉛染色大數據,一般 5-15min長效機製,鉛染后雙蒸水清洗。染色方法如下:
 
  剪一片封口膜數字技術,鋪在桌面上奮戰不懈,使用時(shí)揭開保護(hù)層,滴數(shù)滴染液于封口膜上措施,用鑷子夾住載網(wǎng)的邊緣大大縮短,把貼有切片的一面朝下,使載網(wǎng)浮在液滴上緊密相關,蓋上培養(yǎng)皿更默契了,染色 10-30min。染色時(shí)盡可能避光培訓。載網(wǎng)從染液中取出后不合理波動,必須盡快用雙蒸水清洗干凈。在染色過程中重要工具,鉛染液容易與空氣中的二氧化碳結(jié)合形成碳酸鉛顆粒積極拓展新的領域,而污染切片配套設備。因此,在保存和使用染液時(shí)相對開放,要盡量減少與空氣的接觸推進高水平。為防止鉛沉淀污染,可在培養(yǎng)皿內(nèi)放置少許氫氧化na溝通機製,以吸收空氣中的二氧化碳好宣講。
 
  另一種方法是,使用商業(yè)化的染色硅膠板實現了超越,多為圓形新產品,用鑷子夾住載網(wǎng)邊緣去完善,將其插在硅膠板縫隙中橋梁作用,在載網(wǎng)兩邊滴加染液,蓋上培養(yǎng)皿求索,清洗時(shí)讓人糾結,可直接用洗瓶沖洗多次即可。

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