在蛋白分離時(shí)選擇了合適的蛋白柱大幅增加，有時(shí)往往不能成功地完成蛋白的分離，同一根蛋白分離柱在不同的使用者手中可能會(huì)有不同的柱壽命及分離效果傳承，正確的使用蛋白柱和正確的日常維護(hù)是保證成功分離蛋白及延長柱壽命的關(guān)鍵等特點。
 

　　不論使用什么類型的蛋白柱，首先必須對其填料的性能有基本了解多種。如該柱適用什么樣的溶劑將進一步，什么類型的樣品，流速及耐壓范圍等發展成就，GAT提供的各種類型的蛋白柱應用的因素之一，在柱箱內(nèi)均有詳細(xì)的說明書優化程度，使用柱子前競爭力所在，務(wù)必要仔細(xì)閱讀改善，以保證正確使用這些柱子。下面就蛋白分離中常出現(xiàn)的問題進(jìn)行討論連日來。
 

　　1.樣品不保留：
 

　　在用離子交換柱分離蛋白時(shí)互動互補，流動(dòng)相的pH值對保留值影響很大，當(dāng)選用陰離子型蛋白分析柱時(shí)意向，如若流動(dòng)相的pH值小于蛋白的pI值時(shí)，蛋白分子陽離子狀態(tài)文化價值，則在柱上沒有保留形式，只有當(dāng)流動(dòng)相的pH值大于蛋白的pI值時(shí)置之不顧，蛋白分子呈陰離子，才能在陰離子交換柱上得到保留數字化。另外方便，當(dāng)流動(dòng)相或樣品中的離子強(qiáng)度過大時(shí)，也會(huì)造成蛋白在離子交換柱上不保留各領域。
 

　　此外應用領域，上樣量過大，亦會(huì)使蛋白樣品保留變?nèi)踹M行培訓，一般樣品的上樣量不?yīng)超過該填料結(jié)合蛋白量的20%發展機遇，在選用GPC柱時(shí)，應(yīng)特別注意填料的孔徑及相應(yīng)的可分離蛋白的分子量范圍法治力量，若蛋白的分子量超過填料的孔徑極限則蛋白樣品也不保留全技術方案。
 

　　在用反相色譜分離蛋白時(shí)，流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例會(huì)影響蛋白的保留值共享。有機(jī)溶劑比例過高信息化，會(huì)使蛋白的樣品與填料的作用變?nèi)醵^早地洗脫。流動(dòng)相中的三氟yi酸可作為離子對試劑和pH調(diào)節(jié)劑生動，有利于蛋白的保留新型儲能。
 

　　2.柱壓過高
 

　　柱壓過高的原因在于柱入口的堵塞及填料間的縫隙的減小或堵死，這些原因有：非硅膠填料的顆粒膨脹(主要是由于使用過高比例有機(jī)溶劑引起)新品技；來自樣品範圍，流動(dòng)相的顆粒堵塞、細(xì)菌生長好宣講，流速過高等註入新的動力，為防止柱壓過高，應(yīng)使用符合要求的流動(dòng)相組成。樣品雙重提升，流動(dòng)相使用前嚴(yán)格過濾。為了保存時(shí)防止細(xì)菌生長品牌。以硅膠為基質(zhì)的柱子可使用20%有機(jī)水溶液保存深入開展。其它柱子在保存液中加入0。02%的疊氨鈉等形式。
 

　　3.性能改變
 

　　蛋白柱在使用一段時(shí)間后技術的開發，其性能會(huì)有所改變(保留值變化，柱效下降等)飛躍。原因之一是被分離樣品中細(xì)胞碎片更高效，類脂，酸等的污染重要部署，對聚合物基質(zhì)的柱子可用0具體而言。1-1工具。0N NaOH溶液清洗，注意以硅膠為基質(zhì)的柱子(如Protein Pak凝膠柱)不能用NaOH清洗喜愛。
 

　　4.回收率(質(zhì)量回收率)低
 

　　蛋白質(zhì)量回收率低往往發(fā)生在使用凝膠過濾柱時(shí)重要的角色，特別是以硅膠為基質(zhì)的凝膠蛋白分析柱時(shí)，盡管硅醇基已經(jīng)過雙醇封口向好態勢，但殘留的硅醇基仍會(huì)與蛋白的堿性基團(tuán)發(fā)生非GFC效應(yīng)平臺建設，造成回收率低，分離度差等現(xiàn)象,解決這一現(xiàn)象的方法是在流動(dòng)相(通常是水)中加入0貢獻力量。M-0使用。3M鹽作為改性劑以減少這種非GFC效應(yīng)