在傳統(tǒng)的軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)中，細(xì)胞生長在上層含有細(xì)胞培養(yǎng)基的軟瓊脂中延伸，下層軟瓊脂也與細(xì)胞培養(yǎng)基混合，但含有較高濃度的瓊脂服務好。這可以防止細(xì)胞貼附在培養(yǎng)板上新趨勢，還可以使轉(zhuǎn)化細(xì)胞形成可見的菌落。這種技術(shù)的原理是正常細(xì)胞依靠細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的接觸才能生長和分裂共謀發展，相反數字技術，不管周圍環(huán)境如何，轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有生長和分化的能力市場開拓，因此能夠以錨定獨(dú)立的方式形成菌落的細(xì)胞被認(rèn)為是轉(zhuǎn)化和致癌的措施。
實(shí)驗(yàn)操作：
準(zhǔn)備材料和試劑：
1、配制2×培養(yǎng)基：1 g培養(yǎng)基粉末要落實好，0.2 g碳酸氫鈉緊密相關，加入去離子水，定容到50 mL先進技術。
2培訓、將培養(yǎng)基經(jīng)0.2 μm濾膜過濾除菌。
3宣講手段、加入目標(biāo)細(xì)胞所需培養(yǎng)基的其他成分重要工具。例如：用RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)CMT 167細(xì)胞需要加入10% FBS，1% 青霉素/鏈霉素。使用之前將培養(yǎng)基放在37°C恒溫水浴鍋中更優質。
4相對開放、配制1×培養(yǎng)基，依照目標(biāo)細(xì)胞生長所需培養(yǎng)基配制脫穎而出。
5拓展應用、配制1%瓊脂：1 g瓊脂加入到100 mL去離子水中。
6廣泛應用、配制0.6%瓊脂：0.6 g瓊脂加入到100 mL去離子水中關註度。
7、將配好的瓊脂經(jīng)高溫高壓滅菌哪些領域，滅菌后可放在4°C保存敢於挑戰，使用前加熱至*溶解。
8建立和完善、配制氯化硝基四氮唑藍(lán)試劑：1 mg/mL氯化硝基四氮唑藍(lán)加入到1×PBS中提供了遵循。
鋪下膠：
1、將熔化的1%瓊脂溶液和預(yù)熱的2×培養(yǎng)基放入裝滿熱水（42°C）的桶（或恒溫水浴鍋）中大型，在熱水里放一個(gè)50 mL的錐形管服務效率。將桶放入超凈臺內(nèi)。
2重要意義、6孔板中的每個(gè)孔需要加入1.5 mL混合的瓊脂和培養(yǎng)基統籌發展，為保證足夠的量，一個(gè)6孔板準(zhǔn)備12 mL追求卓越。
3逐漸完善、首先加入6 mL的培養(yǎng)液到50 mL的錐形管，再加入6 mL的1%瓊脂溶液合理需求。將錐形管多次翻轉(zhuǎn)混勻是目前主流，每個(gè)孔中迅速加入1.5 mL混合液，加混合液時(shí)不能產(chǎn)生氣泡高質量。
4充分發揮、室溫靜置30 min，待下膠凝固管理。
鋪上膠：
1設計、收獲的細(xì)胞用胰蛋白酶消化，用培養(yǎng)基以1:5的比例稀釋（如1 mL胰蛋白酶改進措施，加4 mL培養(yǎng)基）提供堅實支撐，放入15 mL錐形管。
2高產、細(xì)胞計(jì)數(shù)：以每孔5000個(gè)細(xì)胞作為起始信息化技術，并根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。
3、細(xì)胞懸浮液的體積需要1.5 mL逐步顯現。一個(gè)6孔板準(zhǔn)備12 mL細(xì)胞懸液銘記囑托。
4、將熔化的0.6%瓊脂溶液放入裝有熱水（42°C）的桶中自動化裝置，在熱水里放一個(gè)50 mL的錐形管示範。將桶放入超凈臺內(nèi)。
5有很大提升空間、以1:1的比例混合0.6%瓊脂溶液和細(xì)胞懸液運行好，吸取6 mL細(xì)胞懸浮液到50 mL錐形管，再加入6 mL的0.6%瓊脂溶液可能性更大〔渴鸢才?；靹蚝笱杆偌尤?孔板中，每孔1.5 ml技術。小心避免產(chǎn)生氣泡推廣開來。
6、室溫靜置30 min相對較高，待上膠凝固后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱堅持好。
7、足夠的菌落形成所需的時(shí)間因每個(gè)細(xì)胞系而異大幅增加，通常為21天左右特性。每星期加兩次100 g的培養(yǎng)基以防止干燥。
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