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支原體培養(yǎng)的操作與方法

閱讀:842      發(fā)布時間:2019-5-9
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    支原體常用培養(yǎng)基為PPLO,很多公司都有出售.但血清 (常用馬血清或豬血清)和抗生素(醋酸跎)你要自己加.你可以查查.還有改良的Frey's培養(yǎng)基,常用的微生物實驗技術(shù)書上都可以查到的深刻內涵鬟f?梢宰约号渲频摹T谝后w培養(yǎng)基中通常要加入酚紅做指示劑的深入闡釋,當(dāng)培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色時相關性,即可判定支原體的生長程度。要強調(diào)一點統籌,支原體的分離可能不太容易成效與經驗,那么要多盲傳幾代。液體培養(yǎng)基變黃后堅實基礎,在固體培養(yǎng)基上單克隆稍有不慎,以純化分離的菌。

    所有解脲等地,人型最為顯著,肺炎,生殖道支原體培養(yǎng)基 規定,均為液態(tài)環境,不知道homiao要分離哪種支原體,需要哪種支原體?

    1高質量、培養(yǎng) :支原體的培養(yǎng)37℃的生化培養(yǎng)箱即可相對簡便,當(dāng)然,初次培養(yǎng)37℃流程,5%-10%co2的二氧化碳培養(yǎng)箱效果更好合作。其中勃勃生機,解脲支原體生長比較快,用我所培養(yǎng)基極致用戶體驗,接種量104- 105ccu提供有力支撐,培養(yǎng)16-18h即可達(dá)到對數(shù)生長期。人型建議,肺炎品率,24-48h即可達(dá)到對數(shù)生長期。

    2不斷發展、鑒定:主要靠菌落染色積極影響、生化反應(yīng)及特異性生長抑制試驗等.

    (1)Dienes菌落染色  Dienes染色液:  美藍(lán) 2.5g  天青-Ⅱ 1.5g   麥芽糖 10g   碳酸鈉 0.5g   蒸餾水 100ml

 染色時,直接吸染色液覆蓋菌落緊密協作,1min后重要手段,用生理鹽水洗去染色液,低倍鏡下可見支原體菌落呈藍(lán)色穩定性,而其他菌菌落不著色像一棵樹。

    (2)生化反應(yīng)

    根據(jù)不同采樣部位及對底物的分解或者作為能源,可以鑒別不同支原體去突破。

    解脲支原 分解尿素不分解精氨酸性能穩定,生成NH3使培養(yǎng)基的ph升高,酚紅指示劑變紅作用。

    人型支原體分解L-精氨酸不分解尿素情況正常,生成NH3使PH值升高,酚紅指示劑變紅技術特點。

    肺炎和人型支原體分解葡萄糖提高鍛煉,使pH降低,酚紅指示劑由紅變黃凝聚力量。

    (3)在含0.002%美藍(lán)的培養(yǎng)基中肺炎支原體能生長且將美藍(lán)還原而退色有所提升,其他口腔、唾液或發(fā)酵支原體均被抑制生長新的力量,此法可鑒定肺炎支原體先進水平。

    (4)分子生物學(xué)鑒定

    由于支原體的基因文庫已建立,通過pcr擴(kuò)增和基因探針技術(shù)可以對支原體進(jìn)行鑒定全面展示。

    如果要自己配制培養(yǎng)基重要平臺,現(xiàn)提供幾種配方:

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基:Hayflick培養(yǎng)基(PPLO培養(yǎng)基),牛心粉 50g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 加14g瓊脂粉為固體培養(yǎng)基

    (1) 肺炎支原體培養(yǎng)基

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml  牛血清 (滅活) 20ml  25%的酵母浸液 10ml  50%葡萄糖 1-2ml 0.4  酚紅 0.5ml  制霉素 0.001g  青霉素 10萬IU  pH 7.8

    (2)人型支原體培養(yǎng)基

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml  馬血清 20ml 25%的酵母浸液 10ml  30%L-精氨酸 0.33ml  0.4%酚紅 0.5ml  制霉素 0.001g  青霉素 10萬IU  pH 6.3

    (3)解脲支原體培養(yǎng)基

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml  馬血清 20ml  25%的酵母浸液 10ml  30%尿素0.33ml  0.4%酚紅 0.5ml  制霉素 0.001g  青霉素 10萬IU   pH 6.0

注:由于支原體能在人工培養(yǎng)基上生長核心技術,但是營養(yǎng)要求較高應用提升,需要提供膽 固醇和酵母才能生長。以上配方中,馬(牛).血清提供膽固醇發展的關鍵,酵母浸液提供酵母道路。

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