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細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的四種方法

閱讀:414      發(fā)布時(shí)間:2019-3-14
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1. 脂質(zhì)體法規劃。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA提高,借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)可以使用。帶正電的陽(yáng)離子脂質(zhì)體則不同,DNA并沒(méi)有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中紮實,而是帶負(fù)電的DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上效高化,形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物,從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面投入力度,經(jīng)過(guò)內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞創造。脂質(zhì)體法始于1987年,此法的出現(xiàn)使得轉(zhuǎn)染效率貢獻法治、轉(zhuǎn)染的穩(wěn)定性和可重復(fù)性大大提高設備製造。陽(yáng)離子脂質(zhì)體細(xì)胞毒性相對(duì)較高,對(duì)不同的細(xì)胞可能會(huì)干擾細(xì)胞的代謝。

2. 電穿孔法管理。通過(guò)短暫的高電場(chǎng)電脈沖處理細(xì)胞顯示,沿細(xì)胞膜的電壓差異會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜的暫時(shí)穿孔。DNA被認(rèn)為是穿過(guò)孔擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)的效率和安。電脈沖和場(chǎng)強(qiáng)的優(yōu)化對(duì)于成功的轉(zhuǎn)染非常重要設計能力,因?yàn)檫^(guò)高的場(chǎng)強(qiáng)和過(guò)長(zhǎng)的電脈沖時(shí)間會(huì)不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞。理論上說(shuō)電穿孔法可用于各種細(xì)胞深入開展,且不需要另外采購(gòu)特殊試劑提供有力支撐,但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA建議,因?yàn)榧?xì)胞的死亡率高品率。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進(jìn)行多次優(yōu)化。

3. 病毒介導(dǎo)的感染用的舒心。感染需要將目的基因克隆到特定的病毒體系中技術發展,經(jīng)過(guò)包裝細(xì)胞的包裝得到改造后的病毒,再進(jìn)行感染集成。優(yōu)點(diǎn)是轉(zhuǎn)染效率特別高重要手段,尤其是難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞、活體細(xì)胞穩定性。缺點(diǎn)是構(gòu)建病毒周期長(zhǎng)像一棵樹,環(huán)節(jié)多,易出錯(cuò)去突破,費(fèi)用也高能運用。

4,非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 智能設備。新研發(fā)的納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑不可缺少,如Entranster試劑,納米材料特點,細(xì)胞毒性小積極回應,轉(zhuǎn)染效率高,漸漸成為各大實(shí)驗(yàn)室的首用轉(zhuǎn)染試劑又進了一步。

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