很多小伙伴在選擇液相色譜柱時都會提到一個問題：“這根色譜柱能上多大的樣品量適應性？”誠然方法，小伙伴們在做分析方法開發(fā)時都會竭力避免色譜柱過載組成部分。因為柱子的過載會造成色譜峰峰形失真形勢，以及理論塔板數(shù)過低的問題。
 

　　特別是小伙伴做有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)中，經(jīng)常會遇到一組分析物中同時包含了較高濃度的主成分(也就是藥物活性成分)和很低濃度的雜質(zhì)(包括工藝雜質(zhì)及降解雜質(zhì))。而為了兼顧低濃度雜質(zhì)的靈敏度設計能力，必然要增大進樣體積品牌，或者提高進樣濃度，確保定量的準確性更為一致。因此等形式，某些時候就會造成色譜柱的過載。
 

　　色譜柱的過載又可以分為質(zhì)量過載和體積過載研究與應用，這里小編就和各位小伙伴聊聊過載的那些事飛躍。
 

　　質(zhì)量過載
 

　　質(zhì)量過載又稱為濃度過載，就是指在小體積進樣時(體積未過載)全面協議，由于進樣濃度較高重要部署，靠近譜峰峰帶的固定相被飽和，也就是說工具，進樣某一組分超過了色譜柱的載樣量而出現(xiàn)過載的現(xiàn)象智慧與合力。一般表現(xiàn)為色譜峰峰形拖尾，柱效較低重要的角色。
 

　　在小體積進樣時開放要求，如果質(zhì)量未超載，隨著樣品量的增加(a

　　隨著樣品量繼續(xù)增加平臺建設，進到色譜柱中的樣品達到飽和服務機製，譜峰就變形了。
 

　　從圖2可以看出推動並實現，隨著進樣質(zhì)量不斷增加薄弱點，譜峰峰寬不斷增加，z終變成了直角三角形的形狀優化程度，同時譜峰的理論塔板數(shù)也不斷降低積極性。通常奮勇向前，對于內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，其載樣量<50μg實施體系。如果是做方法轉(zhuǎn)移到其他色譜柱上組建，則需要調(diào)整進樣量，防止出現(xiàn)過載效果較好。
 

　　載樣量主要與色譜柱固定相和待分析物的性質(zhì)有關(guān)重要的意義。首先固定相類型不一樣，品牌不一樣會造成載樣量較大的差異開拓創新。其次待分析物質(zhì)性質(zhì)也會直接影響到色譜柱載樣量持續發展。例如離子態(tài)的堿性化合物就很容易過載，不僅無法達到<50μg的量級促進善治，有時候甚至1μg的量就能造成過載的現(xiàn)象擴大。因此在常規(guī)疏水反相中，分子態(tài)的堿性化合物比離子態(tài)的堿性化合物有著更高的載樣量發揮效力。目前的推測原因是新格局，離子態(tài)間互相排斥作用使得待分析組分在固定相表面更易達到飽和而造成過載。同時離子態(tài)的帶正電的堿性化合物也更容易和固定相中未鍵合的活性硅羥基發(fā)生次級相互作用安全鏈。針對質(zhì)量超載的問題顯示，Z簡單的方法則是減少進樣量。
 

　　另外真正做到，混合樣品進樣中過載還會導致峰保留時間的變化科普活動。
 

　　例如圖3中，A’習慣，B’為AB組分單獨進樣時的保留分離情況充足。A，B為混合進樣時的保留分離情況的積極性。過載的B不管是單獨進樣還是混合進樣綠色化發展，均保持穩(wěn)定，而A由于過量B的存在不久前，在混合進樣時用上了，保留時間提前。
 

　　雖然每個成分的過載是相對獨立的能力建設，但是在混合樣品進樣過程中會引起的分離度問題關註。這是由于環(huán)境對組分的影響。其中某一組分過載很可能造成混合進樣時保留時間相對于單獨進樣時有所改變無障礙。
 

　　體積過載
 

　　進樣體積太大通常會導致較寬的平頭峰連日來。
 

　　可以看出，隨著進樣體積的增大，峰寬逐漸變寬系統，峰分離度降低增強。
 

　　另外體積過載還會影響峰保留時間，體積過載對保留時間短的組分影響更大交流等，而對于較后面流出的峰影響較小更加廣闊。
 

　　圖5中虛線為正常體積進樣，實線色譜圖為體積過載后的色譜圖防控。
 

　　那么成效與經驗，如何選擇合適的進樣體積呢？
 

　　對于在z佳流速下 堅實基礎，允許樣品進樣的Z大體積為：
 

　　其中：L為柱長(mm)稍有不慎，dc為內(nèi)徑(mm)，dp為粒徑(μm)
 

　　如果小伙伴嫌棄公式太繁瑣深入闡釋，也沒有關(guān)系相關性，貼心的小編已經(jīng)主動把我們常用的各規(guī)格色譜柱列出：
 

　　注：z大進樣體積作了近似整數(shù)處理
 

　　盡管上表中各個數(shù)據(jù)是嚴格按照公式計算出來的，但是這個數(shù)據(jù)并不一定物聯與互聯。色譜是經(jīng)驗科學，較之其他學科需要更多的實踐改造層面。當然供給，理論也為我們指引了方向，讓我們能少走彎路經驗分享。
 

　　各位小伙伴想了解更多有關(guān)色譜柱的知識解決方案，請咨詢月旭當?shù)劁N售人員。